想改善您的显微镜图像吗？您对自己的图像总是这样感到不满吗？别担心，在这里ibidi雷萌将帮助您获得精美的图像！在这里，雷萌将向您展示弯液面的形成是如何干扰相位对比显微镜成像的。如何能获得清晰且对比度良好的图像。　

相差成像

　　到目前为止，相衬是生物光学显微镜中常用的方法。它是细胞培养和活细胞成像中成熟的显微技术。当使用这种廉价的技术时，无需预先固定或标记，就可以在自然状态下观察活细胞。　　

　　未染色的活细胞几乎不吸收光。光吸收不良导致图像中强度分布的差异较小。这使得细胞在明场显微镜下几乎不可见或根本不可见。当光穿过细胞时，会发生小的相移，这是人眼看不到的。在相差显微镜中，这些相移被转换成振幅的变化，可以观察到图像对比度的差异。然而，这种无标记技术在很大程度上取决于光路中组件的正确对齐。这种对准可能会受到自然发生的弯液面效应的干扰，从而导致相衬变弱。　　

　　相差显微镜要考虑的一个重要问题是弯液面，它是在气液界面自然形成的。这种现象会显着降低图像质量，尤其是在像标准96孔板这样的小型培养孔中。由于弯液面而产生的衍射扰乱了光路内相位环和相位板的正确对准。　　

　　左边具有弯液面的光束路径未对准，右边是无弯液面的光路对准正确，相位对比良好。　　

　　如何避免弯液面？　　

　　ibidi开发出了多种解决方案很好地解决了这个问题——并保证相位对比图像：　　

　　* ibidi μ-Slide 15孔3D载玻片和μ-Plate 96孔3D载玻片　　

　　* ibidi channel μ-Slides通道载玻片　　

　　* ibidi μ-Slides PH+　　

　　* ibidi μ-Dish 35 mm Quad四区块 高壁培养皿　　

　　μ-Slide 15孔3D载玻片 (formerly μ-Slide Angiogenesis)和μ-Plate 96孔3D载玻片 (formerly μ-Plate Angiogenesis 96 Well)　　

　　ibidi μ -Slide 15 Well 3D 和μ-Plate 96 Well 3D （下图右）提供理想的细胞培养容器：　　

　　1）可获得相差图像；　　

　　2）一种独特的几何技巧，即“孔中孔”技术，抑制了弯液面的形成，并在整个观察区域产生了良好的相位对比。　　

　　而普通的细胞培养容器（下图左）：　　

　　1）气液界面弯液面：大部分观察区域相差较差。　

　　2）凝胶表面的弯液面：不可能同时聚焦所有细胞。　　

　　ibidi channel μ-Slides通道载玻片　　

　　ibidi channel μ-Slides通道载玻片为相差显微镜提供了理想的光学条件。培养细胞时，通道自下而上充满培养基。这在几何上抑制了弯液面的形成，并在整个通道中实现了相差。　　

　　ibidi μ-Slides PH+　　

　　ibidi μ-Slides PH+（有2 Well Ph+、4 Well Ph+两种规格）专为相差显微镜设计。每个孔中的特殊中间挡板可避免弯液面形成并确保了相差——无论孔的那个部分都能快速成像。　　

　　使用μ-Slide 2 Well Ph+、4 Well Ph+可减少弯液面，增加对比度良好的细胞面积。这种良好的对比是由于中间挡板产生的平行光束路径。　　

　　Ph+孔与标准孔的比较：Ph+孔无弯液面效应　　

　　ibidi μ-Dish 35 mm Quad四区块 高壁培养皿　　

　　中心挡板提供相位对比度　　

　　ibidi μ-Dish 35mm Quad四区块高壁培养皿（左图）居中的中间挡板减少了弯液面的形成，从而实现了相位对比光学。同时，这种Ph+特征有利于细胞的均匀分布。　　

　　就像ibidi μ-Slide 2 Well Ph+和μ-Slider 4 Well Ph+一样，μ-Dish 35mm Quad四区块高壁培养皿将细胞生长和高分辨率显微镜结合在一起，无论是使用相差显微镜还是荧光显微镜。　　

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