内皮细胞，内皮祖细胞，基质细胞的信号联系在血管形成的时候是至关重要的。其中，外分泌体就是其中一种通信方式。有研究发现，外分泌体在免疫应答，肿瘤存活，应激反应和血管生成上的细胞间通信有着非常重要的作用。在外分泌体中有mRNA和miRNA往往会对受体细胞产生影响。荷兰的研究人员对外分泌体内的microRNA miR-214的研究发现，含有miR-214的外分泌体能够减少受体细胞的内皮细胞的衰老，并且促进血管生成的发生。与此同时，其还会减少毛细血管失调症突变体 ataxia telangiectasia mutated (ATM)的表达。
研究人员采用毛细血管内皮细胞系（he human microvascular endothelial cell line (HMEC-1)），铺在基质胶上，采用添加/无外分泌体的培养基培养18小时，对比不同条件下的小管长度。
（一）实验材料和实验方法
1）细胞： HMEC-1 (Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA) 104 per well
2）培养基： MCDB 131 Medium (Life Technologies)
3）基质胶： Matrigel (ECMatrix, Millipore) 10 µl per well
4）耗材： µ-Slide Angiogenesis, ibiTreat (ibidi, 81506) 1 Slide
5）其他： 细格纸 1 sheet
实验流程图：
实验流程图，提前将Matrigel融化，铺于ibidi血管生成载玻片 µSlide Angiogenesis 的下孔中，待胶凝后，将细胞悬液加入血管生成载玻片上孔中，成管后使用显微镜观察。
（二）实验步骤
1）准备基质胶
① 实验前一天将Matrigel置于冰盒中，放入4。C冰箱，使胶能过夜缓慢融化。（注意：同样要准备一些4。C预冷的枪头用于吸取Matrigel）
② 开始实验前，将Matrigel始终保持放在冰盒中。
③ 打开灭菌包装，取出ibidi血光生成载玻片 µ-Slide Angiogenesis。
④ 每孔中加入10μl Matrigel。注意枪头要垂直于内孔的正上方加入Matrigel，防止有Matrigel流经上孔而留下残留胶。
怎么知道加了合适体积的Matrigel：
由于Matrigel流动性不强，并且有可能移液枪不准确，有可能10μl的胶不能填满ibidi血管生成载玻片的下孔，这样，必然会影响到实验的成像结果。这时用一张格子纸就能知道移液枪调整到多少能正好把下孔填满。
如上图所示，垂直透过每个孔看下面的格子纸，如果格子被缩小了，那么就说明胶没加满，格子被放大了，那么胶就加多了，格子没发生什么变形，这才是刚刚加满下孔的状态。
2）凝胶
① 盖上ibidi血管生成载玻片的盖子。
② 准备一个10cm的培养皿，放入浸过水的纸巾，制成一个湿盒。
③ 将ibidi血管生成载玻片放入培养皿中，盖上培养皿盖。
④ 将整个培养皿放入培养箱中，静置30分钟左右，等待胶凝结。
⑤ 等待同时准备细胞悬液。
3）铺细胞
加入细胞的量直接影响实验结果，所以在正式实验开始之前，要对不同类型的细胞和使用数量进行预实验。获得较好比例的细胞密度。使用HMEC-1细胞，每孔种10000个细胞即可。
① 准备密度为2*105cells/ml的细胞悬液，充分混匀。
② 将胶已经凝固的ibidi血管生成载玻片从湿盒中取出。
③ 每孔加入50μl的细胞悬液，注意保持枪头垂直在上孔的上方，不要接触下孔的凝胶。可以使用排枪。
④ 同样用格子纸查看是不是加了足够量的液体，如果没有，加入无细胞的培养基，使上孔液体正好加满。
⑤ 盖上盖，静置，一段时间后，所有细胞都会沉下去落在Matrigel的表面。
4）不同培养基处理
采用无处理基础培养基（basal,-），培养了HMEC-124小时后收集的培养基（cond,comp.）和在基础培养基中加入了分离出来的外分泌体的培养基（basal,+)分别加入血管生成载玻片中，37℃，培养18小时。
5）采集图像并统计结果
可以按照细胞的生长速度定时采集图像，并且对其成管长度测量和记录，并且对其进行统计分析。
三）实验结果
结果可见，18小时后，分别测量3组实验结果的血管长度，统计后发现，加入外分泌体的基础培养基和培养HMEC-1细胞24小时后收集的培养基的成管长度，显著长于纯的基础培养基中的HMEC-1细胞的成管长度。说明，外分泌体对血管生成有着显著的促进作用。
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