食品中常见7种致病菌荧光PCR检测试剂盒采用多重荧光PCR技术,针对食品中常见7种致病菌特有的基因的序列,设计不同荧光标记的探针,通过荧光信号的变化检测食品中是否含有特定的致病菌。该试剂盒适用于多种样本(如食品、食品原料、水产品、牛奶和奶制品、饮料、酒类和化妆品等)中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、大肠杆菌、副溶血弧菌、单增李斯特氏菌和蜡样芽孢杆菌等7种重要致病菌特异性基因的检测。
储存条件及有效期:
试剂盒置于-20℃冰箱中冻存,试剂盒有效期为一年。
试剂盒使用方法:
1)从试剂盒中取出水、PCR反应液、P溶液、阳性和阴性核酸对照,室温融化,置冰箱4℃待用。
2)在1克待检食品样本中加入5 mL水,研磨后,3000 g离心3 min,取上清200 μL用柱法或磁珠法提取细菌基因组DNA,并溶于50 μL水中。
3)反应体系配制:试剂使用前,振荡混匀,3000rpm离心2秒。
在0.2mL平盖PCR薄壁管或平盖PCR八联管中,按上述加样量配制反应体系液(阳性和阴性对照管同样配制,待检DNA溶液换为试剂盒提供的阳性核酸对照和阴性核酸对照,加样量分别为3μL),盖好管盖,去除管中气泡,并用离心机甩离,确保所有液体都在管底。将PCR 管放入荧光PCR检测仪中。
4)荧光PCR检测仪循环条件设定
质控标准:
阴性对照的CT值应等于None;同时阳性对照的CT值应小于30。
否则,此次试验视为无效。(CT值应以S型曲线拐点的循环数为准)
结果判定:
1)CT值为None的样本判定为阴性;CT值小于等于38的样本判定为阳性。
2)CT值大于38的样本建议重做。重做后样本CT值小于等于38则判定为阳性,否则判定为阴性。
3)如果样品志贺氏菌阳性,则P2溶液反应管中FAM和VIC/HEX通道均有扩增曲线。
4)对于某些未呈现S型曲线,但本底较高的样本,应判定为阴性。