禽流感病毒(分型)荧光RT-PCR检测试剂盒采用荧光RT-PCR核酸扩增技术,通过荧光信号的变化检测H1、H3、H5、H7、H9、N1和N2亚型禽流感病毒(Avian Influenza virus, AIV)RNA,可用于多种样本(如禽肉组织、脏器、咽喉拭子、泄殖腔拭子、血清或血细胞、组织渗出液等)上述不同亚型禽流感病毒RNA的检测。
储存条件及有效期:
试剂盒置于-20℃冰箱中冻存,试剂盒有效期为一年。
试剂盒使用方法:
1)从试剂盒中取出DEPC水、RT-PCR反应液、P溶液、阴性和阳性核酸对照,室温融化,酶混合液置冰箱4℃待用。
2)取待检样本(100μL~200μL)用Trizol法或柱法或磁珠法提取RNA,并溶解于100 μL DEPC水中。
3)配反应体系:试剂使用前,振荡混匀,3000rpm离心2秒。
在0.2mL平盖PCR薄壁管或平盖PCR八联管中,按上述体积加入反应体系液(阳性和阴性对照管同样配制,待检RNA溶液换为试剂盒提供的阳性核酸对照和阴性核酸对照,加样量分别为3μL),盖好管盖,去除管中气泡,并用离心机甩离,确保所有液体都在管底。将PCR 管放入荧光PCR检测仪中。质控标准
阴性对照的CT值应等于None;同时阳性对照的CT值应小于等于30。
否则,此次试验视为无效。(CT值应以S型曲线拐点的循环数为准)
结果判定:
1)CT值为None的样本判定为阴性;CT值小于等于38的样本判定为阳性。
2)CT值大于38的样本建议重做。重做后CT值为None判定为阴性,否则判定为阳性。
3)对于某些未呈现S型曲线,但本底较高的样本,应判定为阴性。