牛乳房炎9种致病菌荧光PCR检测试剂盒采用多重荧光PCR技术，针对牛奶中9种主要致病菌特有的基因的序列，设计不同荧光标记的探针，通过荧光信号的变化检测牛奶中是否含有特定的致病菌。该试剂盒适用于多种样本（如牛奶、肉组织、脏器、组织渗出液、全血或血清、尿液、粪便等）中金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌、化脓棒状杆菌、肺炎克雷伯杆菌、无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌和支原体等9种重要致病菌特异性基因的检测。

储存条件及有效期：

　　试剂盒置于-20℃冰箱中冻存，试剂盒有效期为一年。

试剂盒使用方法：

　　1）从试剂盒中取出水、PCR反应液、P溶液、阳性和阴性核酸对照，室温融化，置冰箱4℃待用。

　　2）取待检牛奶样本（1000 μL）用柱法或磁珠法提取DNA，并溶于100 μL水中。

　　3）反应体系配制：试剂使用前，振荡混匀，3000rpm离心2秒。1份牛奶DNA溶液使用3种不同P溶液（P1、P2、P3）分别进行检测

　　在0.2mL平盖PCR薄壁管或平盖PCR八联管中，按上述加样量配制反应体系液（阳性和阴性对照管同样配制，待检DNA溶液换为试剂盒提供的阳性核酸对照和阴性核酸对照，加样量分别为3μL），盖好管盖，去除管中气泡，并用离心机甩离，确保所有液体都在管底。将PCR 管放入荧光PCR检测仪中。

　　4）荧光PCR检测仪循环条件设定

质控标准：

　　阴性对照的CT值应等于None；同时阳性对照的CT值应小于30。

　　否则，此次试验视为无效。（CT值应以S型曲线拐点的循环数为准）

结果判定：

　　1）CT值为None的样本判定为阴性；CT值小于等于35的样本判定为阳性。

　　2）CT值大于35的样本建议重做。重做后样本CT值小于等于35则判定为阳性，否则判定为阴性。

　　3）对于某些未呈现S型曲线，但本底较高的样本，应判定为阴性。