猪传染性胸膜肺炎放线杆菌荧光PCR检测试剂盒采用荧光PCR技术,通过荧光信号的变化检测猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae, APP)基因保守序列。该试剂盒适用于多种样本(如口腔拭子、鼻咽拭子、扁桃体、猪肺组织、细菌培养物等)中猪传染性胸膜肺炎放线杆菌特异性基因的检测。
储存条件及有效期:
试剂盒置于-20℃冰箱中冻存,试剂盒有效期为一年。
试剂盒使用方法:
1)从试剂盒中取出水、PCR反应液、P溶液、阳性和阴性核酸对照,室温融化,置冰箱4℃待用。
2)取待检样本(100μL)用柱法或磁珠法提取DNA,并溶于50μL水中。
3)反应体系配制:试剂使用前,振荡混匀,3000rpm离心2秒。
4)荧光PCR检测仪循环条件设定
质控标准:
阴性对照的CT值应等于None;同时阳性对照的CT值应小于30。
否则,此次试验视为无效。(CT值应以S型曲线拐点的循环数为准)
结果判定:
1)CT值为None的样本判定为阴性;CT值小于等于38的样本判定为阳性。
2)CT值大于38的样本建议重做。重做后CT值为None判定为阴性,否则判定为阳性。
3)对于某些未呈现S型曲线,但本底较高的样本,应判定为阴性。